ATCC細(xì)胞操作指南

收到細(xì)胞的注意事項

　　凍存的ATCC細(xì)胞株和雜交瘤細(xì)胞株在運送過程中使用干冰保持低溫。收到凍存細(xì)胞后，可以立即解凍復(fù)蘇，去除二甲基亞砜（DMSO）后進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)。如果不立即復(fù)蘇培養(yǎng)細(xì)胞，必須將細(xì)胞凍存管放置于液氮罐存儲

。請不要將細(xì)胞存儲在-130℃以上的溫度。如果溫度不夠低，達(dá)不到-130℃，細(xì)胞活力會迅速下降。

　　產(chǎn)品說明書和質(zhì)檢報告（COA）

　　ATCC每個細(xì)胞株都有一份產(chǎn)品說明書（product sheet），其中包含細(xì)胞株的信息和詳細(xì)的操作指南。細(xì)胞株的所有詳細(xì)介紹可以在ATCC網(wǎng)站找到，產(chǎn)品說明書和COA也可以從ATCC網(wǎng)站下載。

　　凍存細(xì)胞的復(fù)蘇和培養(yǎng)

　　1.先準(zhǔn)備好細(xì)胞培養(yǎng)皿或細(xì)胞培養(yǎng)瓶，及產(chǎn)品說明推薦的相應(yīng)細(xì)胞培養(yǎng)基。并在37℃水浴中預(yù)先溫?zé)峒?xì)胞培養(yǎng)基。

　　2.小心取出裝有細(xì)胞的凍存管，保持管蓋擰緊，將凍存管蓋以下的部分置于37℃水浴中并輕微的攪拌以幫助解凍。解凍過程應(yīng)該盡快，大約短于2分鐘或待最后一塊小冰晶體剛?cè)诨蛻?yīng)將細(xì)胞凍存管取出水浴。

　　3.在從水浴中取出的細(xì)胞凍存管表面噴灑70%乙醇配制的消毒劑，用無菌紙巾或紗布試干。之后的操作步驟都應(yīng)該遵循在無菌條件下生物安全柜中嚴(yán)格操作。

　　4.小心擰開凍存管的頂部，將管內(nèi)容物用1ml移液槍轉(zhuǎn)移到含9毫升培養(yǎng)基的無菌離心管中。離心5到7分鐘(125×g),小心吸去上清液以去除抗凍劑(二甲基亞砜)，避免丟失細(xì)胞沉淀。

將細(xì)胞沉淀重懸于配好的培養(yǎng)基中

。將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)容器，輕輕搖晃使細(xì)胞均勻的分布。

生長較慢的細(xì)胞株可重懸于5-8ml培養(yǎng)基并轉(zhuǎn)移到T25培養(yǎng)瓶。生長較快的細(xì)胞株可重懸于12-20ml培養(yǎng)基并轉(zhuǎn)移到T75培養(yǎng)瓶。ATCC網(wǎng)站有各個細(xì)胞株的具體生長狀況及培養(yǎng)方法記載。

　　5.將細(xì)胞培養(yǎng)容器置于細(xì)胞培養(yǎng)箱，在溫度37℃,二氧化碳濃度5%的培養(yǎng)條件下進(jìn)行孵育。細(xì)胞培養(yǎng)24小時后應(yīng)在顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)和生長狀況。

　　為了確保細(xì)胞活力、遺傳基因型穩(wěn)定和表型的穩(wěn)定，細(xì)胞株的培養(yǎng)需要保持在對數(shù)期。這意味著需要定期對細(xì)胞進(jìn)行傳代。并且注意在細(xì)胞進(jìn)入生長平臺期之前，

即單層細(xì)胞100%匯合長滿前或懸浮細(xì)胞達(dá)到其推薦的最大細(xì)胞密度之前，要進(jìn)行細(xì)胞傳代。監(jiān)測細(xì)胞生長和繪制每個細(xì)胞株的生長曲線都有助于確定細(xì)胞株的生長特性。